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超微量分光光度計如何測定核酸濃度

更新日期:2018年1月22日 大字 小字
  Micro Drop超微量分光光度計買到手要如何使用呢?如何用來測定核酸濃度呢?

超微量分光光度計如何測定核酸濃度


  1、首先,Micro Drop 超微量分光光度計樣品保留系統上下部的光學表面清潔干凈的去離子水的2至3uL,吹打至較低的光學表面。
  2、接著關閉杠桿臂,要確保上層基座與去離子水相接觸。然后抬起杠桿臂和一個清潔、無塵、干燥的實驗室擦拭光學表面擦去。
  3、打開Micro Drop軟件,然后選擇相應的核酸程序,接著使用一個小批量的校準移液器緩沖液配藥到比較低的光學表面,用來執行一個空白的測量。
  4、等到空白測量完成后,將兩個光學表面與一個清潔、干燥、無塵的實驗室擦拭干凈。
  5、接著選擇適當的常數要測量的樣品。
  6、免除至較低的光學基座1uL的核酸樣品,并且關閉力臂。由于測量的物體是獨立的體積,所以樣品只需要彌合兩者之間的光學表面為測量的差距。
  7、在App中選擇“測量”。App內會自動幫你算出核酸濃度和純度比例。
  8、一個典型的核酸樣本,將有一個非常有特點的姿態展現在你眼前。
  9、與特定的核酸分離技術相關的常見污染物的來源包括苯酚/Trizol法和列提取。在苯酚/Trizol法提取的情況下,殘留試劑的污染可能是由220至240nm之間的異常光譜,以及在260?280nm區域的變化。相反,從列提取的殘留胍可能導致附近230納米的高峰期,在從230納米到約240納米的槽的轉變。
  10、為了準確地評估樣品的質量,260/280或二百三分之二百六十○比率應在與整體的光譜質量結合分析。純核酸通常產量的1.8?260/280的比例和DNA和RNA的2.0?260/280的比例,分別。這個比率是依賴于用于空白和樣品測量的緩沖pH值和離子強度。酸性溶液中會根據代表0.2-0.3的比例,而一個基本的解決方案將超過代表比例由0.2-0.3。顯著不同純度率可能表明存在蛋白質,酚或其他污染物,達到或接近280nm處的強烈吸收。二百三十零分之二百六十零純度比一個“純”核酸一般在1.8-2.2范圍內的值的第二項措施是DNA的純度。純度的比例明顯低于預期值低可能表明所使用的隔離技術,可能需要進一步優化。
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